1、裝柱子：

   裝柱子（添硅膠）時，有兩種方法：即濕法裝柱和干法裝柱，二者各有優劣。不論干法還是濕法，硅膠（固定相）的上表面一定要平整，并且硅膠（固定相）的高度一般為15cm左右，太短了可能分離效果不好，太長了也會由于擴散或拖尾導致分離效果不好。濕法裝柱是先把硅膠用適當的溶劑拌勻后，再填入柱子中，然后再加壓用淋洗劑“走柱子”，本法大的優點是一般柱子裝的比較結實，沒有氣泡。干法裝柱則是直接往柱子里填入硅膠，然后再輕輕敲打柱子兩側，至硅膠界面不再下降為止，然后再填入硅膠至合適高度，后再用油泵直接抽，這樣就會使得柱子裝的很結實。

2、上樣：

   上樣也有干法和濕法之分；干法就是把待分離的樣品用少量溶劑溶解后，再加入少量硅膠，拌勻后再旋去溶劑。如此得到的粉末再小心加到柱子的頂層。干法上樣較麻煩，但可以保證樣品層很平整。濕法上樣就是用少量溶劑（好就是展開劑，如果展開劑的溶解度不好，則可以用一極性較大的溶劑，但必須少量）將樣品溶解后，再用膠頭滴管轉移得到的溶液，沿著層析柱內壁均勻加入。然后用少量溶劑洗滌后再加入。濕法較方便，熟手一般采用此法。

3、走柱子：

   接著是用淋洗劑“走柱子”，一般淋洗劑是采用TLC分析(后有詳細介紹)得到的展開劑的比例再稀釋一倍后的溶劑。通常上面加壓，下面再用油泵抽，這樣可以加快速度。干法裝柱較方便，但大的缺陷在于"走柱子"時，由于溶劑和硅膠之間的吸附放熱（可以用手摸柱子明顯感覺到），容易產生氣泡，這一點在使用低沸點的淋洗劑時如乙醚、二氯甲烷更為明顯。雖然產生的氣泡在加壓的情況下不易察覺，但是一旦撤去壓力，如在上樣、加溶劑等操作的時候，氣泡就會釋放出來，嚴重時，整個柱子變花，樣品不可能平整地通過，當然也就談不上分離了。

解決的辦法是：*、硅膠一定要結實；第二、一定要用較多的溶劑"走柱子"，一定要到柱子的下端不再發燙，恢復到室溫后再撤去壓力。也有介紹在硅膠的上層填上一小層石英砂，防止添加溶劑的時候，使得樣品層不再整齊。但個人感覺是如果小心上樣，添加溶劑，則沒有這個必要。

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